Ďakujeme za návštevu nature.com. Verzia prehliadača, ktorú používate, má obmedzenú podporu CSS. Najlepšie výsledky vám odporúčame, aby ste použili novšiu verziu prehliadača (alebo zakáže režim kompatibility v Internet Explorer). Medzitým, aby sme zaistili nepretržitú podporu, zobrazujeme web bez stylingu alebo JavaScript.
Mikrobiálny rast rán sa často prejavuje ako biofilmy, ktoré interferujú s hojením a je ťažké ho eradikovať. Nové strieborné dresingy tvrdia, že bojujú proti infekciám rán, ale ich účinnosť antibiofilmu a liečivé účinky nezávislé od infekcie nie sú všeobecne známe. Použitím in vitro a in vivo biofilmových modelov Staphylococcus aureus a Pseudomonas aeruginosa uvádzame účinnosť obväzu generujúcich Ag1+ iónov; AG1+ dresingy obsahujúce etyléndiamíntetraoctovú kyselinu a chlorid benzetónia (AG1+/EDTA/BC) a obväzy obsahujúce dusičnan strieborný (AG oxysalts). , ktoré produkujú ióny Ag1+, Ag2+ a Ag3+ na boj proti biofilmu rany a jeho účinku na hojenie. Obväzovanie AG1+ mali minimálne účinky na biofilm rany in vitro a u myší (C57BL/6J). Naopak, okysličené Ag soli a obväzy Ag1+/EDTA/BC významne znížili počet životaschopných baktérií v biofilmoch in vitro a preukázali významné zníženie zložiek bakteriálnych a EPS v biofilmoch rany myši. Tieto obväzy mali odlišné účinky na hojenie rán infikovaných biofilmom a ne-biofilmovo infikované rany, pričom okysličené soľné obväzy mali priaznivejšie účinky na reepitelizáciu, veľkosť rán a zápal v porovnaní s kontrolnými ošetreniami a inými striebornými obväzu. Rôzne fyzikálno-chemické vlastnosti obväzov striebra môžu mať rôzne účinky na biofilm rany a hojenie, čo by sa malo zohľadniť pri výbere obväzu na liečbu rán infikovaných biofilmom.
Chronické rany sú definované ako „rany, ktoré nedokážu postupovať v normálnych štádiách hojenia usporiadaným a včasným spôsobom“ 1. Chronické rany vytvárajú pre pacientov a systém zdravotnej starostlivosti psychologické, sociálne a ekonomické bremeno. Ročné výdavky NHS na liečbu rán a súvisiacich komorbidít sa v rokoch 2017–182 odhadujú na 8,3 miliardy GBP. Chronické rany sú v súčasnosti aj v Spojených štátoch naliehavým problémom, pričom Medicare odhaduje ročné náklady na liečbu pacientov so zraneniami na 28,1 - 96,8 miliárd dolárov.
Infekcia je hlavným faktorom, ktorý bráni hojeniu rán. Infekcie sa často prejavujú ako biofilmy, ktoré sú prítomné u 78% neohýbajúcich chronických rán. Biofilmy sa tvoria, keď sa mikroorganizmy stanú ireverzibilne pripojenými k povrchom, ako sú povrchy rán, a môžu sa agregovať za vzniku spoločenstiev extracelulárneho polyméru (EP). Biofilm rany je spojený so zvýšenou zápalovou reakciou, ktorá vedie k poškodeniu tkaniva, ktorá môže oneskoriť alebo zabrániť hojeniu4. Zvýšenie poškodenia tkaniva môže byť čiastočne spôsobené zvýšenou aktivitou matricových metaloproteináz, kolagenázy, elastázy a reaktívnych druhov kyslíka5. Okrem toho sú zápalové bunky a biofilmy sami sami vysokými spotrebiteľmi kyslíka, a preto môžu spôsobiť lokálnu hypoxiu tkaniva, ktorá vyčerpáva bunky životne dôležitého kyslíka potrebného na účinnú opravu tkaniva6.
Zrelé biofilmy sú vysoko rezistentné na antimikrobiálne látky, ktoré si vyžadujú agresívne stratégie na kontrolu biofilmových infekcií, ako je mechanická liečba, po ktorej nasleduje účinná antimikrobiálna liečba. Pretože biofilmy sa môžu rýchlo regenerovať, účinné antimikrobiálne môžu znížiť riziko reformácie po chirurgickom debridemente7.
Striebro sa čoraz viac používa v antimikrobiálnych obväzoch a často sa používa ako liečba prvej línie chronických infikovaných rán. Existuje mnoho komerčne dostupných strieborných obväzov, z ktorých každá obsahuje iné zloženie striebra, koncentráciu a základnú matricu. Pokroky v strieborných náravách viedli k rozvoju nových strieborných náramkov. Kovová forma striebra (AG0) je inertná; Na dosiahnutie antimikrobiálnej účinnosti musí stratiť elektrón na vytvorenie iónového striebra (Ag1+). Tradičné strieborné dresingy obsahujú strieborné zlúčeniny alebo kovové striebro, ktoré, keď sú vystavené tekutine, sa rozkladajú na vytvorenie iónov Ag1+. Tieto ióny Ag1+ reagujú s bakteriálnou bunkou a odstraňujú elektróny zo štrukturálnych komponentov alebo kritických procesov potrebných na prežitie. Patentovaná technológia viedla k vývoju novej striebornej zlúčeniny, AG oxysalts (dusičnan strieborný, AG7NO11), ktorá je súčasťou obväzu na rany. Na rozdiel od tradičného striebra, rozklad soli obsahujúcich kyslík produkuje stavy striebra s vyššou valenciou (Ag1+, Ag2+a Ag3+). Štúdie in vitro ukázali, že nízke koncentrácie okysličených strieborných solí sú účinnejšie ako jednotlivé iónové striebro (Ag1+) proti patogénnym baktériám, ako sú pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus a Escherichia coli8,9. Ďalším novým typom dresingu striebra zahŕňa ďalšie prísady, konkrétne kyselinu etyléndiamíntetraoctovú (EDTA) a chlorid benzetónia (BC), o ktorých sa uvádza, že sa zameriava na biofilm EPS, a tým zvyšuje penetráciu striebra do biofilmu. Tieto nové strieborné technológie ponúkajú nové spôsoby, ako sa zamerať na biofilmy rany. Vplyv týchto antimikrobiálnych látok na prostredie rany a hojenie nezávislé od infekcie je však dôležité, aby sa zabezpečilo, že nevytvárajú nepriaznivé prostredie rany alebo oneskorenie hojenia. Obavy týkajúce sa cytotoxicity striebra in vitro boli hlásené s niekoľkými striebornými dresingmi10,11. Cytotoxicita in vitro sa však zatiaľ nepreložená do toxicity in vivo a niekoľko obväzov AG1+ preukázalo dobrý bezpečnostný profil12.
Tu sme skúmali účinnosť obväzov karboxymetylcelulózy obsahujúcich nové formulácie striebra proti biofilmu rany in vitro a in vivo. Okrem toho sa hodnotili účinky týchto obväzov na imunitné reakcie a hojenie nezávisle od infekcie.
Všetky použité obväzy boli komerčne dostupné. 3M kerracel gélové vlákno dresingu (3M, Knutsford, UK) je neantimikrobiálny 100% karboxymetylcelulóza (CMC) gélové vlákno, ktorý sa v tejto štúdii použil ako kontrolný obväz. Hodnotili sa tri antimikrobiálne dresingy Silver CMC, konkrétne 3M Kerracel Ag Dressing (3M, Knutsford, UK), ktoré obsahuje 1,7%hmotn. Oxygenovaná strieborná soľ (Ag7NO11) vo vyšších valenčných strieborných iónoch (Ag1+, Ag2+a Ag3+). Počas rozkladu iónov AG7NO11, Ag1+, Ag2+ a Ag3+ sa tvoria v pomere 1: 2: 4. Aquacel Ag Extra Dressing obsahujúci 1,2% chlorid strieborného (AG1+) (Convatec, Deeside, UK) 13 a Aquacel AG+extra obväz obsahujúci 1,2% chlorid strieborného (AG1+), EDTA a Benzethonium chlorid (Convatec, Deeside, UK) 14.
Kmene použité v tejto štúdii boli Pseudomonas aeruginosa NCTC 10781 (verejné zdravie v Anglicku, Salisbury) a Staphylococcus aureus NCTC 6571 (verejné zdravie v Anglicku, Salisbury).
Baktérie sa pestovali cez noc v bujóne Muller-Hinton (Oxoid, Altrincham, UK). Kultúra pre noc bola potom zriedená 1: 100 v Mueller-Hinton Both a 200 ul na sterilných 0,2 µm Whatman Cyclopore Membrán (Whatman Plc, Maidstone, UK) na Mueller-Hinton Agar Plates (Sigma-Aldrich Company Ltd, Kent, Veľká Británia. ). ) Tvorba koloniálneho biofilmu pri 37 ° C počas 24 hodín. Tieto koloniálne biofilmy boli testované na logaritmické zmršťovanie.
Obväzky nakrájajte na 3 cm2 štvorcové kusy a predkožné so sterilnou deionizovanou vodou. Vložte obväz na biofilm kolónie na agarovú dosku. Každých 24 ha biofilmu bolo odstránených a životaschopné baktérie v biofilme (CFU/ml) boli kvantifikované sériovým riedením (10-1 až 10-7) v dennom uhlovej neutralizačnej bujóne (Merck-millipore). Po 24 hodinách inkubácie pri 37 ° C sa na platne Agar Mueller-Hinton Agar uskutočňovali štandardné počty dosiek. Každé ošetrenie a časový bod sa uskutočňovali trojmo a počet dosiek sa opakoval pre každé riedenie.
Koža z bravčového brucha sa získava od samíc veľkých bielych ošípaných do 15 minút od zabitia v súlade s vývoznými normami Európskej únie. Koža sa oholila a vyčistila utierkami alkoholu, potom zmrazená pri -80 ° C počas 24 hodín, aby sa devitalizala pokožka. Po rozmrazení sa 1 cm2 kožné kúsky premyli trikrát PBS, 0,6% chlórnanu sodného a 70% etanolu zakaždým po dobu 20 minút. Pred odstránením epidermy odstráňte akýkoľvek zostávajúci etanol umytím trikrát v sterilnom PBS. Koža sa kultivovala v 6-jamkovej doštičke s nylonovou membránou s hrúbkou 0,45 μm (Merck-millipore) na vrchu a 3 absorpčné vankúšiky (Merck-millipore) obsahujúce 3 ml fetálne hovädzie sérum (Sigma) doplnené 10% modifikovaným Dulbeccom modifikovaným Orol. Médium (Dulbecco's Modified Eagle Médium - Aldrich Ltd.).
Koloniálne biofilmy sa pestovali tak, ako je opísané v štúdiách expozície biofilmu. Po kultivácii biofilmu na membráne počas 72 hodín sa biofilm aplikoval na povrch kože pomocou sterilnej inokulačnej slučky a membrána sa odstránila. Biofilm sa potom inkuboval na derme ošípaných ďalších 24 hodín pri 37 ° C, aby sa biofilm umožnil dozrievať a dodržiavať pokožku ošípaných. Po dozretí a pripevnení biofilmu sa na povrch pokožky aplikoval 1,5 cm2 obväz, ktorý sa predbehol sterilnou destilovanou vodou a inkuboval sa pri 37 ° C počas 24 hodín. Životaschopné baktérie sa vizualizovali zafarbením rovnomerným aplikovaním činidla životaschopnosti presttoblue buniek (Invitrogen, Life Technologies, Paisley, UK) na apikálny povrch každého explantátu a inkubáciu po dobu 5 minút. Použite digitálny fotoaparát Leica DFC425 na okamžité zachytenie obrázkov na mikroskope Leica MZ8. Oblasti farebnej ružovej boli kvantifikované pomocou softvéru Image Pro Software verzia 10 (Media Cybernetics Inc, Rockville, MD Image-Pro (Mediacy.com)). Skenovacia elektrónová mikroskopia sa uskutočňovala tak, ako je opísané nižšie.
Baktérie pestované cez noc boli zriedené 1: 100 v bujóne Mueller-Hinton. Do sterilnej 0,2 μm Whatman Cyclopore Membrána (Whatman, Maidstone, UK) sa pridalo 200 ul kultúry (Whatman, Maidstone, UK) a natiahla sa na Mueller-Hinton Agar. Biofilmové platne sa inkubovali pri 37 ° C počas 72 hodín, aby sa umožnila tvorba zrelej biofilmu.
Po 3 dňoch dozrievania biofilmu sa obväz s štvorcom 3 cm2 umiestnil priamo na biofilm a inkuboval sa pri 37 ° C počas 24 hodín. Po odstránení obväzu z povrchu biofilmu sa do povrchu každého biofilmu počas 20 sekúnd pridal 1 ml činidla životaschopnosti buniek presttolulue (Invitrogen, Waltham, MA). Povrchy sa sušili pred zaznamenaním zmien farieb pomocou digitálneho fotoaparátu Nikon D2300 (Nikon UK Ltd., Kingston, UK).
Pripravte nočné kultúry na agar Mueller-Hinton, preneste jednotlivé kolónie na 10 ml Mueller-Hinton Both a inkubujte na trepačke pri 37 ° C (100 ot / min). Po inkubácii cez noc bola kultúra zriedená 1: 100 v bujóne Mueller-Hinton a 300 ul sa zaznamenalo na 0,2 μm kruhový membrána Whatman Whatman Cyclopore (Whatman International, Maidstone, UK) na agar Mueller-Hinton a inkubovalo sa pri 37 ° C pri 37 ° C do 37 ° C do 37 ° C do 37 ° C do 72 hodín C. . . Zrelý biofilm sa aplikoval na ranu, ako je opísané nižšie.
Všetky práce so zvieratami sa uskutočňovali na University of Manchester na základe projektovej licencie schválenej Úradom pre blaho zvierat a etické preskúmanie (P8721BD27) av súlade s usmerneniami uverejnené domácou kanceláriou v rámci revidovanej ASPA v roku 2012. Všetci autori dodržiavali pokyny pre príchod. Osemtýždňové myši C57BL/6J (Envigo, Oxon, UK) sa použili na všetky štúdie in vivo. Myši boli anestetizované izofluranom (Piramal Critical Care Ltd, West Drayton, UK) a ich dorzálne povrchy sa oholili a vyčistili. Každá myš bola potom poskytnutá excízná rana 2 × 6 mm pomocou biopsie Stiefel (Schuco International, Hertfordshire, UK). V prípade rán infikovaných biofilm aplikujte 72-hodinový koloniálny biofilm pestovaný na membráne, ako je opísané vyššie, na dermálnu vrstvu rany pomocou sterilnej inokulačnej slučky bezprostredne po poranení a zlikvidujte membránu. Jeden štvorcový centimeter dresingu je vopred otepovaný sterilnou vodou, aby sa udržal prostredie vlhkého rany. Obväzy sa aplikovali priamo na každú ranu a pokryté filmom 3M Tegaderm (3M, Bracknell, UK) a tekutým lepidlom Mastisol (Eloquest Healthcare, Ferndale, MI) aplikovaným okolo okrajov, aby sa zabezpečila ďalšia adhézia. Buprenorfín (Animalcare, York, UK) sa podával pri koncentrácii 0,1 mg/kg ako analgetikum. Myši vyradia tri dni po zranení pomocou metódy plánu 1 a podľa potreby odstráňte, na polovicu a uložte oblasť rany.
Farbenie hematoxylínu (ThermoFisher Scientific) a eozín (ThermoFisher Scientific) sa uskutočňovalo podľa protokolu výrobcu. Oblasť rany a reepitelializácia boli kvantifikované pomocou softvéru Image Pro Software verzia 10 (Media Cybernetics Inc, Rockville, MD).
Tkanivové rezy boli devené v xyléne (ThermoFisher Scientific, Loughborough, UK), rehydratované so 100 - 50% etanolom a stručne ponorené do deionizovanej vody (Termofisher Scientific). Immunohistochémia sa uskutočňovala pomocou súpravy Vectastain Elite ABC PK-6104 (Vector Laboratories, Burlingame, CA) podľa protokolu výrobcu. Primárne protilátky proti neutrofilom NIMP-R14 (ThermoFisher Scientific) a makrofágov MS CD107B Pure M3/84 (BD Biosciences, Wokingham, UK) boli zriedené 1: 100 v blokovacom roztok ABC a vektorová nova červená peroxidáza (HRP) substrátová súprava (Vector Laboratories, Burlingame, CA) a kontrastne farbené hematoxylínom. Obrázky sa získali pomocou mikroskopu Olympus BX43 a digitálneho fotoaparátu Olympus DP73 (Olympus, Southend-on-Sea, UK).
Vzorky kože boli fixované v 2,5% glutaraldehydu a 4% formaldehydu v 0,1 M Hepes (pH 7,4) počas 24 hodín pri 4 ° C. Vzorky boli dehydratované pomocou odstupňovaného etanolu a sušené v CO2 s použitím sušičky kritického bodu Korum K850 (Quorum Technologies Ltd, Loughton, UK) a rozprašovania potiahnuté zliatinou zlata Palladium pomocou systému výpisu SC7620 SC7620 MINI. Vzorky sa zobrazovali pomocou skenovacieho elektrónového mikroskopu FEI Quanta 250 (ThermoFisher Scientific) na vizualizáciu centrálneho bodu rany.
Tým jodidom (2 μM) sa aplikoval na vyrezaný povrch rany myši a inkuboval sa 5 minút pri 37 ° C (ThermoFisher Scientific) a ošetrený SYTO-60 (10 μM) pri 37 ° C (termofisher Scientific). 15-minútové obrázky Z-Stack boli vytvorené pomocou Leica TCS SP8.
Biologické a technické replikačné údaje boli uvedené do tabuľky a analyzované pomocou softvéru GraphPad Prism V9 (GraphPad Software, La Jolla, CA). Jednosmerná analýza rozptylu s viacerými porovnaniami s použitím Dunnettovho post hoc testu sa použila na testovanie rozdielov medzi každým ošetrením a neantimikrobiálnym kontrolným obväzom. Hodnota P <0,05 sa považovala za významnú.
Účinnosť vláknitých obväzov strieborného gélu sa prvýkrát hodnotila proti biofilmovým kolóniám Staphylococcus aureus a Pseudomonas aeruginosa in vitro. Strieborné dresingy obsahujú rôzne vzorce striebra: tradičné strieborné dresingy produkujú ióny AG1+; Strieborné dresingy, ktoré dokážu produkovať ióny Ag1+ po pridaní EDTA/BC, môžu zničiť biofilmovú matricu a vystavovať baktérie striebre pod antibakteriálnym účinkom striebra. Ióny15 a obväzy obsahujúce okysličené Ag soli, ktoré produkujú ióny Ag1+, Ag2+ a Ag3+. Jeho účinnosť sa porovnávala s neantimikrobiálnym kontrolným obväzom vyrobeným z gélových vlákien. Zostávajúce životaschopné baktérie v biofilme sa hodnotili každých 24 hodín počas 8 dní (obrázok 1). V deň 5 sa biofilm reinokuloval s 3,85 × 105 s. Staphylococcus aureus alebo 1,22 × 105p. Aeruginosa na vyhodnotenie zotavenia biofilmu. V porovnaní s obväzmi neantimikrobiálnej kontroly mali obväzy AG1+ minimálny účinok na životaschopnosť bakteriálnej v biofilmoch Staphylococcus aureus a Pseudomonas aeruginosa počas 5 dní. Naopak, obväzy obsahujúce okysličené AG a AG1 + + EDTA/BC soli boli účinné pri usmrcovaní baktérií v biofilme do 5 dní. Po opakovanom inokulácii s planktónovými baktériami v deň 5 sa nepozorovalo žiadne obnovenie biofilmu (obr. 1).
Kvantifikácia životaschopných baktérií v biofilmoch Staphylococcus aureus a Pseudomonas aeruginosa po ošetrení dresingmi striebra. Biofilmové kolónie Staphylococcus aureus a Pseudomonas aeruginosa boli ošetrené dresingmi striebra alebo neantimikrobiálnymi kontrolnými obväzmi a počet zostávajúcich životaschopných baktérií sa stanovil každých 24 hodín. Po 5 dňoch sa biofilm reinokuloval s 3,85 × 105 s. Staphylococcus aureus alebo 1,22 × 105p. Kolónie bakterioplanktónu pseudomonas aeruginosa sa vytvorili individuálne na vyhodnotenie zotavenia biofilmu. Grafy ukazujú priemernú +/- štandardnú chybu.
Na vizualizáciu účinku strieborných obväzov na životaschopnosť biofilmu sa obväzy aplikovali na zrelé biofilmy pestované na ošípanej koži ex vivo. Po 24 hodinách sa obväz odstráni a biofilm je zafarbený modrým reaktívnym farbivom, ktorý sa metabolizuje živými baktériami na ružovú farbu. Biofilmy ošetrené kontrolnými obväzmi boli ružové, čo naznačuje prítomnosť životaschopných baktérií v biofilme (obrázok 2A). Naopak, biofilm ošetrený obväzom oxysolov Ag bol primárne modrý, čo naznačuje, že zostávajúce baktérie na povrchu kože ošípaných boli nežistibilné baktérie (obrázok 2B). Zmiešané modré a ružové sfarbenie sa pozorovalo v biofilmoch ošetrených obväzmi obsahujúcimi AG1+, čo naznačuje prítomnosť životaschopných a neživotných baktérií v biofilme (obrázok 2C), zatiaľ čo obväzy EDTA/BC obsahujúce AG1+ boli prevažne modré s ružovými škvrnami. indikujúce oblasti, ktoré nie sú ovplyvnené dresingom striebra (obrázok 2D). Kvantifikácia aktívnych (ružových) a neaktívnych (modrých) oblastí ukázala, že kontrolná náplasť bola aktívna 75% (obrázok 2E). Obväzovanie AG1 + + EDTA/BC sa konali podobne ako okysličené slané dresingy Ag, s mierou prežitia 13% a 14%. Obväz Ag1+ tiež znížil životaschopnosť baktérií o 21%. Tieto biofilmy sa potom pozorovali pomocou skenovacej elektrónovej mikroskopie (SEM). Po ošetrení kontrolným obväzom a obväzom Ag1+ sa pozorovala vrstva pseudomonas aeruginosa pokrývajúca ošípanú kožu (obrázok 2F, H), zatiaľ čo po ošetrení obväzom Ag1+ sa našlo len málo bakteriálnych buniek a bolo nájdených niekoľko bakteriálnych buniek. Kolagénové vlákna sa môžu považovať za tkanivovú štruktúru ošípanej kože (obrázok 2G). Po ošetrení obväzom AG1 + + EDTA/BC boli viditeľné bakteriálne plaky a podkladové kolagénové vlákna (obrázok 2i).
Vizualizácia biofilmu Pseudomonas aeruginosa po ošetrení dresingom striebra. (A-D) Bakteriálna životaschopnosť v biofilmoch pseudomonas aeruginosa pestovaných na ošípanej koži sa vizualizovala pomocou farbiva na životaschopnosť prestoklulue 24 hodín po ošetrení dresingmi striebra alebo neantimikrobiálnymi kontrolnými obväzmi. Živé baktérie sú ružové, neživoridné baktérie a koža ošípaných sú modré. (E) Kvantifikácia biofilmov Pseudomonas aeruginosa pestovaných na ošípanej koži (ružová škvrna) pomocou skenovacej elektrónovej mikroskopie Image Pro verzia 10 (FI) a ošetrené strieborným obväzom alebo neantimikrobiálnym kontrolným obväzom počas 24 hodín. SEM mierka lišty = 5 µm. (J - M) Koloniálne biofilmy rástli na filtroch a boli zafarbené prestoblue reaktívnym farbivom po 24 hodinách inkubácie so striebornými dresingmi.
Aby sa určilo, či úzky kontakt medzi obväzmi a biofilmami ovplyvnil účinnosť obväzu, koloniálne biofilmy umiestnené na rovnom povrchu boli ošetrené dresingmi 24 hodín a potom zafarbené reaktívnymi farbivami. Neošetrený biofilm mal tmavo ružovú farbu (obrázok 2J). Na rozdiel od biofilmov ošetrených obväzmi obsahujúcimi okysličené Ag soli (obrázok 2K), biofilmy ošetrené dresingmi obsahujúcimi Ag1+ alebo Ag1++ EDTA/BC vykazovali pásy ružového zafarbenia (obrázok 2L, M). Toto ružové sfarbenie naznačuje prítomnosť životaschopných baktérií a je spojené s plochou stehu v obväzu. Tieto zošité oblasti vytvárajú mŕtve priestory, ktoré umožňujú prežiť baktérie v biofilme.
Na vyhodnotenie účinnosti strieborných obväzov in vivo sa ošetrené biofilmymi vyrezaných myší s plnou hrúbkou myší infikovaných dozrievaným dresingom S. aureus a P. aeruginosa boli ošetrené obväzumi neantimikrobiálnych ovládacích prvkov alebo striebornými dresingmi. Po 3 dňoch liečby makroskopická analýza obrazu ukázala menšie veľkosti rany, keď boli ošetrené okysličenými sálovými dresingmi v porovnaní s obväzmi mimo antimikrobiálnej kontroly a inými dresingmi striebra (obrázok 3A-H). Na potvrdenie týchto pozorovaní sa zbierali rany a oblasť rany a reepitelizácia sa kvantifikovala na sekciách tkanív zafarbených hematoxylínom a eozínom pomocou softvéru Image Pro Software 10 (obrázok 3i-L).
Účinok strieborných obväzu na povrch rany a opätovné epitelizácie rán infikovaných biofilmmi. (A - H) malé bunky infikované biofilmami Pseudomonas aeruginosa (A - D) a Staphylococcus aureus (E - H) po troch dňoch ošetrenia neantimikrobiálnym kontrolným obväzom, okysličeným obväzom so soľou AG, AG1+ obliekania Ag1+ obliekanie. Reprezentatívne makroskopické obrazy. Rany myší s obväzom Ag1 + + EDTA/BC. (IL) Reprezentatívna infekcia pseudomonas aeruginosa, histologické rezy zafarbené hematoxylínom a eozínom, používané na kvantifikáciu plochy rany a regenerácie epitelu. Kvantifikácia plochy rany (M, O) a percentuálna reepiteliácia (N, P) rán infikovaných biofilmmi pseudomonas aeruginosa (M, N) a Staphylococcus aureus (O, P) (na liečenú skupinu N = 12). Grafy ukazujú priemernú +/- štandardnú chybu. * znamená p = <0,05 ** znamená p = <0,01; Makroskopická stupnica = 2,5 mm, histologická stupnica = 500 um.
Kvantifikácia plochy rany v ranách infikovaných biofilmom pseudomonas aeruginosa (obrázok 3M) ukázala, že rany ošetrené oxysaltmi Ag mali priemernú veľkosť rany 2,5 mm2, zatiaľ čo neantimikrobiálny kontrolný obväz mal priemernú veľkosť rany 3,1 mm2, čo nie je pravda. dosiahol štatistickú významnosť (obrázok 3M). p = 0,423). Rany ošetrené Ag1+ alebo Ag1++ EDTA/BC nevykazovali žiadne zníženie oblasti rán (3,1 mm2 a 3,6 mm2). Ošetrenie okysličeným obväzom so soľou Ag podporovanej repetelializácie vo väčšej miere ako neantimikrobiálny kontrolný obväz (34% a 15%; p = 0,029) a Ag1+ alebo Ag1++ EDTA/BC (10% a 11%) ( Obrázok 3N). . , respektíve).
Podobné trendy v oblasti rany a regenerácie epitelu boli pozorované u rán infikovaných biofilmmi S. aureus (obrázok 3o). Obväzy obsahujúce okysličené soli striebra znížili plochu rany (2,0 mm2) o 23% v porovnaní s kontrolným neantimikrobiálnym obväzom (2,6 mm2), hoci táto redukcia nebola významná (p = 0,304) (obr. 3O). Okrem toho bola plocha rany v skupine s liečbou Ag1+ mierne znížená (2,4 mm2), zatiaľ čo rana ošetrená obväzom Ag1++ EDTA/BC neznížila oblasť rany (2,9 mm2). Kyslíkové soli Ag tiež podporovali repitelizáciu rán infikovaných biofilmom S. aureus (31%) vo väčšej miere ako tie, ktoré boli ošetrené obväzmi neantimikrobiálnych kontrol (12%, p = 0,003) (obrázok 3P). Obliekanie Ag1+ (16%, p = 0,903) a obväz Ag+ 1+ EDTA/BC (14%, p = 0,965) vykazovali hladiny regenerácie epitelu podobnú kontrole.
Na vizualizáciu účinku strieborných obväzov na biofilmovú maticu sa uskutočnilo farbenie toto 1 a Syto 60 jodidu (obr. 4). Tým 1 jodid je farbivo prenikajúce do bunky, ktoré sa môže použiť na presnú vizualizáciu extracelulárnych nukleových kyselín, ktoré sú hojné v EP biofilmov. Syto 60 je bunka priepustné farbivo používané ako kontrastain16. Pozorovania jodidu toto 1 a Syto 60 v ranách inokulovaných biofilmmi Pseudomonas aeruginosa (obrázok 4A-D) a Staphylococcus aureus (obrázok 4i-L) ukázali, že po 3 dňoch obväzového ošetrenia sa EPS v biofilme významne znížila. obsahujúce okysličené soli Ag a Ag1 + + EDTA/BC. Obväzovanie AG1+ bez ďalších antibiofilmových zložiek významne znížili DNA bez buniek v ranách inokulovaných pseudomonas aeruginosa, ale boli menej účinné v ranách inokulovaných stafylococcus aureus.
In vivo zobrazovanie biofilmu rany po 3 dňoch ošetrenia ovládacími alebo striebornými dresingmi. Konfokálne obrazy Pseudomonas aeruginosa (A - D) a Staphylococcus aureus (I - L) zafarbené týmto 1 (zelenými) na vizualizáciu extracelulárnych nukleových kyselín, zložka extracelulárnych biofilmových polymérov. Na zafarbenie intracelulárnych nukleových kyselín použite SYTO 60 (červená). kyseliny. P. skenovacia elektrónová mikroskopia rán infikovaných biofilmmi Pseudomonas aeruginosa (E - H) a Staphylococcus aureus (M - P) po 3 dňoch ošetrenia ovládacími a striebornými dresingmi. SEM mierka lišty = 5 µm. Stupnica konfokálnej zobrazovacej stupnice = 50 um.
Skenovacia elektrónová mikroskopia ukázala, že myši naočkované biofilmovými kolóniami Pseudomonas aeruginosa (obrázok 4E-H) a Staphylococcus aureus (obrázok 4M-P) mali vo svojich ranách výrazne menej baktérií po 3 dňoch liečby so všetkými obväzmi striebra.
Na vyhodnotenie účinku obväzov striebra na zápal rán u myší infikovaných biofilmom boli rezy rán infikovaných biofilmom ošetrené kontrolnými alebo striebornými obväzmi počas 3 dní imunohistochemicky zafarbené pomocou protilátok špecifických pre neutrofily a makrofágy. Kvantitatívne stanovenie neutrofilov a makrofágov interne. Granulačné tkanivo. Obrázok 5). Všetky strieborné dresingy znížili počet neutrofilov a makrofágov v ranách infikovaných pseudomonas aeruginosa v porovnaní s obväzmi mimo antimikrobiálnej kontroly po troch dňoch liečby. Ošetrenie oxygenovaným obväzom striebornej soli však viedlo k väčšiemu zníženiu neutrofilov (p = <0,0001) a makrofágov (p = <0,0001) v porovnaní s inými testovanými striebornými obväzmi (obrázok 5i, j). Aj keď AG1++ EDTA/BC mal väčší vplyv na biofilm rany, znížila hladiny neutrofilov a makrofágov v menšej miere ako obväz Ag1+. Mierne rany infikované biofilmom S. aureus sa tiež pozorovali po obliekaní s Ag (p = <0,0001), Ag1+ (p = 0,0008) a Ag1 ++ EDTA/BC (p = 0,0043) oxizolov v porovnaní s kontrolami. Podobné trendy sú pozorované pre neutropéniu. obväz (obr. 5k). Avšak iba okysličovaný obväz Ag soli vykazoval významné zníženie počtu makrofágov v granulačnom tkanive v porovnaní s kontrolami v rán infikovaných biofilmmi S. aureus (p = 0,0339) (obrázok 5L).
Neutrofily a makrofágy boli kvantifikované v ranách infikovaných biofilmmi pseudomonas aeruginosa a Staphylococcus aureus po 3 dňoch liečby neantimikrobiálnou kontrolou alebo obväzmi striebra. Neutrofily (AD) a makrofágy (EH) boli kvantifikované v tkanivových rezoch zafarbených protilátkami špecifickými pre neutrofily alebo makrofágy. Kvantifikácia neutrofilov (I a K) a makrofágov (J a L) v rán infikovaných biofilmmi Pseudomonas aeruginosa (I a J) a Staphylococcus aureus (K & L). N = 12 na skupinu. Grafy ukazujú priemernú +/- štandardnú chybu, hodnoty významnosti v porovnaní s obväzom mimo antibakteriálneho riadenia, * znamená p = <0,05, ** znamená p = <0,01; *** znamená p = <0,001; označuje p = <0,0001).
Potom sme vyhodnotili účinok strieborných obväzov na liečenie nezávislé od infekcie. Neinfikované excízálne rany sa ošetreli 3 dňami antimikrobiálnym kontrolným obväzom alebo strieborným obväzom (obrázok 6). Medzi testovanými striebornými dresingmi sa na makroskopických obrazoch objavili iba rany ošetrené okysličenými soľnými obväzmi menšie ako rany ošetrené kontrolou (obrázok 6A-D). Kvantifikácia plochy rany pomocou histologickej analýzy ukázala, že priemerná plocha rany po ošetrení obväzom oxysolov Ag bola 2,35 mm2 v porovnaní s 2,96 mm2 pre rany ošetrené kontrolnou skupinou, ale tento rozdiel nedosiahol štatistickú významnosť (p = 0,488) (obr. . Naopak, po ošetrení sa pozorovalo žiadne zníženie oblasti rán po ošetrení obväzmi AG1+ (3,38 mm2, p = 0,757) alebo AG1++ EDTA/BC (4,18 mm2, p = 0,054) v porovnaní s kontrolnou skupinou. Zvýšená epitelová regenerácia sa pozorovala pri obväzu oxysolu Ag v porovnaní s kontrolnou skupinou (30% oproti 22%), hoci to nedosiahlo významnosť (p = 0,067), je to dosť významné a potvrdzuje predchádzajúce výsledky. Obliekanie s oxysolmi podporuje opätovnú epitelizáciu. -Epitelizácia neinfikovaných rán17. Naopak, ošetrenie obväzu Ag1+ alebo Ag1++ EDTA/BC nemalo žiadny účinok alebo preukázal zníženú reepitelizáciu v porovnaní s kontrolou.
Účinok dresingu strieborných rán na hojenie rán u neinfikovaných myší s úplnou resekciou. (AD) Reprezentatívne makroskopické obrazy rán po troch dňoch liečby neantimikrobiálnym kontrolným obväzom a strieborným obväzom. (EH) Reprezentatívne rezy rany zafarbené hematoxylínom a eozínom. Kvantifikácia plochy rany (I) a percenta reepitelizácie (J) sa vypočítala z histologických rezov v strede rany pomocou softvéru na analýzu obrazu (n = 11–12 na liečebnú skupinu). Grafy ukazujú priemernú +/- štandardnú chybu. * znamená p = <0,05.
Striebro má dlhú anamnézu použitia ako antimikrobiálnu terapiu pri hojení rán, ale mnoho rôznych formulácií a metód dodávania môže mať za následok rozdiely v antimikrobiálnej účinnosti 18. Okrem toho nie sú úplne pochopené vlastnosti antibiofilmu špecifických systémov dodávania striebra. Aj keď hostiteľská imunitná reakcia je relatívne účinná proti planktónovým baktériám, vo všeobecnosti je menej účinná proti biofilms19. Planktonické baktérie sú ľahko fagocytované makrofágmi, ale v rámci biofilmov agregované bunky predstavujú ďalšie problémy obmedzením reakcie hostiteľa na rozsah, v akom môžu imunitné bunky podstúpiť apoptózu a uvoľňovať prozápalové faktory na zvýšenie imunitnej reakcie20. Zistilo sa, že niektoré leukocyty môžu preniknúť do Biofilms21, ale nie sú schopné fagocytózové baktérie, keď je táto obrana ohrozená22. Na podporu imunitnej reakcie hostiteľa proti infekcii biofilmu rany by sa mal použiť holistický prístup. Debridement rany môže fyzicky narušiť biofilm a odstrániť väčšinu bioburdenu, ale imunitná reakcia hostiteľa môže byť neúčinná proti zostávajúcemu biofilmu, najmä ak je ohrozená imunitná reakcia hostiteľa. Antimikrobiálne terapie, ako sú napríklad dresingy striebra, môžu podporovať imunitnú reakciu hostiteľa a eliminovať biofilmové infekcie. Zloženie, koncentrácia, rozpustnosť a substrát dodávania môžu ovplyvniť antimikrobiálnu účinnosť striebra. V posledných rokoch spoločnosť Advances in Technology v technológii striebra zvýšila tieto obväzy účinnejších9,23. Ako sa technológia Silver Dressing Technology rozvíja, je dôležité pochopiť účinnosť týchto obväzu pri kontrole infekcie rán a čo je dôležitejšie, vplyv týchto silných foriem striebra na prostredie rany a uzdravenie.
V tejto štúdii sme porovnali účinnosť dvoch pokročilých strieborných obväzu s konvenčnými striebornými obväzmi, ktoré produkujú ióny AG1+ proti biofilmom pomocou rôznych modelov in vitro a in vivo. Posúdili sme tiež vplyv týchto obväzu na prostredie rany a hojenie nezávislé od infekcie. Aby sa minimalizoval vplyv dodávkovej matrice, všetky testované strieborné obväzy boli zložené z karboxymetylcelulózy.
Naše predbežné vyhodnotenie týchto strieborných obväzov proti koloniálnym biofilmom Pseudomonas aeruginosa a Staphylococcus aureus ukazuje, že na rozdiel od tradičných dresingov Ag1+, dva pokročilé strieborné dresingy, AG1++ EDTA/BC a Oxygenované AG soli Ag, účinne zabíjajú biofilmové baktérie v rámci v rámci v rámci v rámci v rámci v rámci v rámci v rámci v rámci biofilme baktérií v rámci biofilme baktérií v rámci v rámci v rámci v rámci biofilme baktérií v rámci v rámci v rámci biofilme baktérií v rámci v rámci v rámci biofilme baktérií v rámci v rámci v rámci biofilme baktérií v rámci v rámci v rámci biofilme baktérií v vnútri Niekoľko dní. Okrem toho tieto obväzy bránia reformácii biofilmu po opakovanom vystavení planktónovým baktériám. Obväz Ag1+ obsahoval chlorid strieborného, rovnakú striebornú zlúčeninu a základnú matricu ako Ag1++ EDTA/BC a mal obmedzený účinok na životaschopnosť bakteriálnej v rámci biofilmu v rovnakom období. Pozorovanie, že obväz Ag1++ EDTA/BC bol účinnejší proti biofilmu ako obväz Ag1+ pozostávajúci z tej istej matrice a striebornej zlúčeniny podporuje myšlienku, že na zvýšenie účinnosti chloridu striebra proti biofilmu sú potrebné ďalšie zložky inde15. Tieto výsledky podporujú myšlienku, že BC a EDTA zohrávajú ďalšiu úlohu prispievajúcu k celkovej efektívnosti obväzov a že neprítomnosť tejto zložky v obväzoch AG1+ mohla prispieť k zlyhaniu účinnosti in vitro. Zistili sme, že okysličené slané dresingy produkujúce Ag2+ a Ag3+ vykazovali silnejšiu antibakteriálnu účinnosť ako Ag1+ a na úrovniach podobných Ag1++ EDTA/BC. Avšak kvôli vysokému redoxnému potenciálu nie je jasné, ako dlho zostávajú ióny Ag3+ aktívne a účinné proti biofilmom rany, a preto si zaslúžia ďalšiu štúdiu. Okrem toho existuje veľa rôznych obväzov, ktoré generujú ióny AG1+, ktoré neboli testované v tejto štúdii. Tieto obväzy sa skladajú z rôznych strieborných zlúčenín, koncentrácií a základných matíc, ktoré môžu ovplyvniť dodávanie iónov Ag1+ a ich účinnosť proti biofilmom. Je tiež potrebné poznamenať, že existuje veľa rôznych modelov in vitro a in vivo na vyhodnotenie účinnosti obväzov rany proti biofilmom. Typ použitého modelu, ako aj obsah soli a proteínov v médiu používanom v týchto modeloch ovplyvnia účinnosť obväzu. V našom modeli in vivo sme umožnili biofilmu dozrieť in vitro a potom ho preniesli na dermálny povrch rany. Imunitná reakcia hostiteľskej myši je relatívne účinná proti planktónovým baktériám aplikovaným na ranu, čím sa pri liečení rany vytvára biofilm. Pridanie zrelého biofilmu do rany obmedzuje účinnosť imunitnej reakcie hostiteľa na tvorbu biofilmu tým, že umožní zrelému biofilmu etablovať sa v rane pred začiatkom uzdravenia. Náš model nám teda umožňuje vyhodnotiť účinnosť antimikrobiálnych obväzov na zrelé biofilmy skôr, ako sa rany začnú liečiť.
Zistili sme tiež, že obliekanie ovplyvnilo účinnosť strieborných obväzov na biofilmoch pestovaných in vitro a ošípanej pokožky. Blízky kontakt s ranou sa považuje za kritický pre antimikrobiálnu účinnosť obväzu24,25. Obväzy obsahujúce okysličené Ag soli boli v úzkom kontakte so zrelými biofilmami, čo malo za následok významné zníženie počtu životaschopných baktérií v biofilme po 24 hodinách. Na rozdiel od toho, keď sú ošetrené obväzmi Ag1+ a Ag1++ EDTA/BC, zostalo značné množstvo životaschopných baktérií. Tieto obväzy obsahujú stehy pozdĺž celej dĺžky obväzu, čo vytvára mŕtve priestory, ktoré bránia úzkym kontaktom s biofilmom. V našich štúdiách in vitro tieto nekontaktné oblasti bránili zabíjaniu životaschopných baktérií v biofilme. Hodnotili sme životaschopnosť baktérií až po 24 hodinách liečby; Postupom času, keď sa obliekanie stáva nasýtením, môže byť menej mŕtveho priestoru, čím sa zníži oblasť týchto životaschopných baktérií. To však zdôrazňuje dôležitosť zloženia obväzu, nielen typu striebra v obväzu.
Zatiaľ čo štúdie in vitro sú užitočné na porovnanie účinnosti rôznych strieborných technológií, je tiež dôležité porozumieť účinkom týchto obväzov na biofilmy in vivo, kde hostiteľské tkanivá a imunitné reakcie prispievajú k účinnosti obväzu proti biofilmom. Účinok týchto obväzu na biofilmy rany sa pozoroval pomocou skenovacej elektrónovej mikroskopie a farbenia biofilmu EPS pomocou intracelulárnych a extracelulárnych farbív DNA. Zistili sme, že po 3 dňoch liečby boli všetky obväzy účinné pri znižovaní DNA bez buniek v ranách infikovaných biofilmom, ale obväz Ag1+ bol menej účinný pri ranách infikovaných Staphylococcus aureus. Skenovacia elektrónová mikroskopia tiež ukázala, že významne menej baktérií bolo prítomných v ranách ošetrených dresingmi striebra, hoci to bolo výraznejšie s okysleným obväzom so soľou Ag a obväzom Ag1++ EDTA/BC v porovnaní s obväzom Ag1+. Tieto údaje ukazujú, že testované strieborné obväzy mali rôzny stupeň vplyvu na biofilmovú štruktúru, ale žiadny zo strieborných obväzu nebol schopný eradikovať biofilm, čo podporuje potrebu holistického prístupu k liečbe infekcií biofilmu rany; Použitie strieborných náramkov. Liečbe predchádza fyzickým debridementom na odstránenie väčšiny biofilmu.
Chronické rany sú často v stave závažného zápalu, pričom nadmerné zápalové bunky zostávajú v tkanive rany po dlhšiu dobu, čo spôsobuje poškodenie tkaniva a vyčerpávajú kyslík potrebný na účinný bunkový metabolizmus a funkciu v ranu26. Biofilmy zhoršujú toto nepriateľské prostredie rany negatívnym ovplyvňovaním hojenia rôznymi spôsobmi, vrátane inhibície proliferácie buniek a migrácie a aktivácie prozápalových cytokinov27. Keď sa strieborné dresingy stávajú efektívnejšie, je dôležité pochopiť vplyv, ktorý majú na prostredie rany a uzdravenie.
Je zaujímavé, že hoci všetky strieborné obväzy ovplyvnili zloženie biofilmu, iba okysličené dresingy striebornej soli zvýšili opätovnú epitelizáciu týchto infikovaných rán. Tieto údaje podporujú naše predchádzajúce zistenia17 a zistenia Kalan et al. (2017) 28, ktoré preukázali dobré profily bezpečnosti a toxicity okysličených strieborných solí, pretože nižšie koncentrácie striebra boli účinné proti biofilmom.
Naša súčasná štúdia zdôrazňuje rozdiely v technológii striebra medzi obväzmi antimikrobiálnych striebra a vplyv tejto technológie na prostredie rany a liečenie nezávislé od infekcie. Tieto výsledky sa však líšia od predchádzajúcich štúdií, ktoré ukazujú, že obväz Ag1 + + EDTA/BC zlepšil parametre hojenia poškodených králičích uší in vivo. Môže to však byť spôsobené rozdielmi v zvieracích modeloch, časoch merania a metódach bakteriálnej aplikácie29. V tomto prípade sa merania rán uskutočňovali 12 dní po zranení, aby sa umožnilo aktívne zložky obväzu pôsobiť na biofilm počas dlhšieho časového obdobia. This is supported by a study that showed that clinically infected leg ulcers treated with Ag1+ + EDTA/BC initially increased in size after one week of treatment, and then over the next 3 weeks of treatment with Ag1+ + EDTA/BC and within 4 weeks of Použitie neantimikrobiálnych látok. drogy. Obväzovanie CMC na zníženie veľkosti vred30.
Ukázalo sa, že niektoré formy a koncentrácie striebra sú cytotoxické in vitro 11, ale tieto výsledky in vitro nie vždy prekladajú do nepriaznivých účinkov in vivo. Okrem toho pokroky v technológii striebra a lepšie porozumenie strieborným zlúčeninám a koncentráciám v obväzoch viedli k rozvoju mnohých bezpečných a efektívnych strieborných dresingov. Avšak, ako postupuje technológia Silver Dressing Technology, je dôležité pochopiť vplyv týchto obväzu na prostredie rany31,32,33. Predtým sa uvádza, že zvýšená miera reepitelizácie zodpovedá zvýšenému podielu protizápalových M2 makrofágov v porovnaní s prozápalovým fenotypom M1. Toto bolo zaznamenané v predchádzajúcom modeli myši, kde sa obväzy rany Silver Hydrogel porovnali s sulfadiazínom strieborným a neantimikrobiálnym hydrogélom34.
Chronické rany môžu vykazovať nadmerný zápal a bolo pozorované, že prítomnosť nadbytočných neutrofilov môže byť škodlivá pre hojenie rán35. V štúdii u myší s delikátnymi neutrofilmi, prítomnosť neutrofilov oneskorila reepitelizáciu. Prítomnosť nadmerných neutrofilov vedie k vysokým hladinám proteáz a reaktívnym druhom kyslíka, ako je superoxid a peroxid vodíka, ktoré sú spojené s chronickými a pomaly liehajúcimi ranymi37,38. Podobne aj zvýšenie počtu makrofágov, ak sú nekontrolované, môže viesť k oneskorenému hojeniu rán39. Toto zvýšenie je obzvlášť dôležité, ak makrofágy nie sú schopné prejsť z prozápalového fenotypu na fenotyp protedingu, čo vedie k tomu, že rany nedokážu ukončiť zápalovú fázu hojenia40. Pozorovali sme zníženie neutrofilov a makrofágov v ranách infikovaných biofilmom po 3 dňoch ošetrenia so všetkými striebornými obväzmi, ale pokles bol výraznejší s okyslačnými sálovými obväzmi. Toto zníženie môže byť priamym výsledkom imunitnej reakcie na striebro, reakciu na znížený bioburden alebo rana je v neskoršom štádiu hojenia, a teda imunitných buniek v rane. Zníženie počtu zápalových buniek v rane môže udržiavať prostredie vedúce k hojeniu rán. Mechanizmus pôsobenia toho, ako Ag oxysalts podporuje hojenie nezávislé od infekcie, nie je jasný, ale schopnosť oxysaltov Ag na výrobu kyslíka a ničenie škodlivých hladín peroxidu vodíka, mediátora zápalu, to môže vysvetliť a vyžaduje si ďalšiu štúdiu17.
Chronické rany infikované nelietaniami predstavujú problém pre lekárov aj pacientov. Aj keď veľa obväzu tvrdí antimikrobiálnu účinnosť, výskum sa zriedka zameriava na ďalšie kľúčové faktory ovplyvňujúce mikroprostredie rany. Táto štúdia ukazuje, že rôzne technológie striebra majú odlišnú antimikrobiálnu účinnosť a, čo je dôležité, rôzne účinky na prostredie rany a hojenie, nezávisle od infekcie. Aj keď tieto štúdie in vitro a in vivo ukazujú účinnosť týchto obväzov pri liečbe infekcií rany a podporovaní hojenia, na vyhodnotenie účinnosti týchto obväzov na klinike sú potrebné randomizované kontrolované štúdie.
Použité a/alebo analyzované údaje o údajoch počas súčasnej štúdie sú k dispozícii od príslušného autora na primeranú žiadosť.
Čas príspevku: júl-15-2024