Ďakujeme za návštevu nature.com. Verzia prehliadača, ktorú používate, má obmedzenú podporu CSS. Najlepšie výsledky odporúčame používať novší prehliadač (alebo režim kompatibility v Internet Explorer). Medzitým, aby sme zaistili pokračujúcu podporu, zobrazíme web bez štýlov a JavaScript.
Zriadenie zvieracích modelov modických zmien (MC) je dôležitým základom pre štúdium MC. Päťdesiatštyri novozélandských bielych králikov bolo rozdelených na fing-operačnú skupinu, skupinu svalovej implantácie (ME Group) a implantačná skupina Nucleus Pulposus (skupina NPE). V skupine NPE bol intervertebrálny disk exponovaný anterolaterálnym bedrovým chirurgickým prístupom a na prepichnutie stavového tela L5 v blízkosti koncovej dosky sa použila ihla. NP sa extrahoval z medziskupiny L1/2 injekčnou striekačkou a vstrekol do neho. Vŕtanie diery v subchondrálnej kosti. Chirurgické zákroky a metódy vŕtania v skupine svalovej implantácie a skupine sum-operačnej skupiny boli rovnaké ako v implantačnej skupine NP. V skupine ME sa do diery umiestnil kúsok svalu, zatiaľ čo v skupine Fing-Operation sa do diery vložilo nič. Po operácii sa vykonalo skenovanie MRI a molekulárne biologické testovanie. Signál v skupine NPE sa zmenil, ale v skupine Fing-Operation a ME Group nedošlo k žiadnej zjavnej zmene signálu. Histologické pozorovanie ukázalo, že abnormálna proliferácia tkaniva bola pozorovaná v mieste implantácie a expresia IL-4, IL-17 a IFN-y sa zvýšila v skupine NPE. Implantácia NP do subchondrálnej kosti môže tvoriť zvierací model MC.
Modické zmeny (MC) sú lézie stavcových koncov a susednej kostnej drene viditeľnej pri zobrazovaní magnetickej rezonancie (MRI). Sú celkom bežné u jedincov s pridruženými symptómami1. Mnohé štúdie zdôraznili dôležitosť MC v dôsledku jeho súvislosti s nízkymi bolesťami chrbta (LBP) 2,3. De Roos a kol .4 a Modic a kol. Modické zmeny typu I sú hypointenzívne na sekvenciách T1-vážených (T1W) a hyperintense na sekvenciách vážených (T2W) T2. Táto lézia odhaľuje fissúrové endplates a susedné vaskulárne granulačné tkanivo v kostnej dreni. Modické zmeny typu II ukazujú vysoký signál na sekvenciách T1W aj T2W. Pri tomto type lézie je možné nájsť deštrukciu koncovej dosky, ako aj histologickú mastnú výmenu susednej kostnej drene. Modické zmeny typu III ukazujú nízky signál v sekvenciách T1W a T2W. Boli pozorované sklerotické lézie zodpovedajúce koncovým doskám6. MC sa považuje za patologické ochorenie chrbtice a úzko súvisí s mnohými degeneratívnymi chorobami chrbtice7,8,9.
Vzhľadom na dostupné údaje niekoľko štúdií poskytlo podrobný pohľad na etiológiu a patologické mechanizmy MC. Albert a kol. navrhol, že MC môže byť spôsobená herniou diskov8. Hu a kol. pripisoval MC závažnej degenerácii diskov10. KROC navrhol koncept „vnútorného prasknutia diskov“, v ktorom sa uvádza, že opakujúce sa trauma diskov môže viesť k mikroteretám v koncovej doske. Po vytvorení rozštiepenia môže deštrukcia koncovej dosky nukleus pulposus (NP) vyvolať autoimunitnú reakciu, ktorá ďalej vedie k rozvoju MC11. Ma a kol. zdieľal podobný názor a uviedol, že autoimunita indukovaná NP hrá kľúčovú úlohu v patogenéze MC12.
Bunky imunitného systému, najmä CD4+ T pomocné lymfocyty, hrajú rozhodujúcu úlohu v patogenéze autoimunity13. Nedávno objavená podskupina Th17 produkuje prozápalový cytokín IL-17, podporuje expresiu chemokínu a stimuluje T bunky v poškodených orgánoch na výrobu IFN-y14. Bunky Th2 tiež hrajú jedinečnú úlohu v patogenéze imunitných reakcií. Expresia IL-4 ako reprezentatívnej bunky Th2 môže viesť k závažným imunopatologickým následkom15.
Aj keď sa vykonalo mnoho klinických štúdií na MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, stále existuje nedostatok vhodných experimentálnych modelov zvierat, ktoré môžu napodobňovať proces MC, ktorý sa často vyskytuje u ľudí a môže byť Používa sa na skúmanie etiológie alebo novej liečby, ako je cielená terapia. Doteraz bolo hlásených iba niekoľko zvieracích modelov MC, ktoré študujú základné patologické mechanizmy.
Na základe autoimunitnej teórie, ktorú navrhli Albert a MA, táto štúdia vytvorila jednoduchý a reprodukovateľný model králikov MC autotransplantáciou NP v blízkosti vŕtanej koncovej doštičky stavcov. Ďalšími cieľmi je pozorovať histologické charakteristiky zvieracích modelov a vyhodnotiť špecifické mechanizmy NP pri vývoji MC. Na tento účel používame na štúdium progresie MC techniky, ako je molekulárna biológia, MRI a histologické štúdie.
Počas operácie zomreli dvaja králiky na krvácanie a počas MRI zomreli štyria králiky počas anestézie. Zostávajúcich 48 králikov prežilo a nevykazovalo žiadne behaviorálne alebo neurologické príznaky po operácii.
MRI ukazuje, že intenzita signálu zabudovaného tkaniva v rôznych otvoroch je iná. Intenzita signálu telesného tela L5 v skupine NPE sa postupne zmenila po 12, 16 a 20 týždňoch po vložení (T1W sekvencia vykazovala nízky signál a T2W sekvencia vykazovala zmiešaný signál plus nízky signál) (obr. 1C), zatiaľ čo MRI sa objavuje Z ďalších dvoch skupín zabudovaných častí zostali v rovnakom období relatívne stabilné (obr. 1A, b).
(A) Reprezentatívne sekvenčné MRI králikovej bedrovej chrbtice v 3 časových bodoch. Na obrazoch skupiny Fing-Operation sa nezistili žiadne abnormality signálu. (B) Charakteristiky signálu stavcového tela v skupine ME sú podobné ako v skupine Fing-Operačná skupina a v priebehu času sa v mieste vkladania nepozoruje žiadna významná zmena signálu. (C) V skupine NPE je nízky signál jasne viditeľný v sekvencii T1W a zmiešaný signál a nízky signál sú zreteľne viditeľné v sekvencii T2W. Od 12-týždňového obdobia do 20-týždňového obdobia klesajú sporadické vysoké signály obklopujúce nízke signály v sekvencii T2W.
Zjavná kostná hyperplázia je možné vidieť v implantačnom mieste tela stavcov v skupine NPE a kosti hyperplázia sa vyskytuje rýchlejšie od 12 do 20 týždňov (obr. 2C) v porovnaní so skupinou NPE, v modelovanom stavbe nie je pozorovaná žiadna významná zmena. telá; SHM GROUP a ME Group (Obr. 2C) 2a, b).
A) Povrch stavového tela v implantovanej časti je veľmi hladký, otvor sa dobre uzdravuje a v stavcovom tele nie je žiadna hyperplázia. (B) Tvar implantovaného miesta v skupine ME je podobný ako v fingovanej operácii a v priebehu času neexistuje zrejmá zmena vzhľadu implantovaného miesta. (C) Kostná hyperplázia sa vyskytla na implantovanom mieste v skupine NPE. Kostná hyperplázia sa rýchlo zvýšila a dokonca sa rozširovala cez medzistátorový disk do kontralaterálneho tela stavcov.
Histologická analýza poskytuje podrobnejšie informácie o tvorbe kostí. Obrázok 3 zobrazuje fotografie pooperačných sekcií zafarbených H&E. V skupine Fing-Operácia boli chondrocyty dobre usporiadané a nezistila sa žiadna proliferácia buniek (obr. 3A). Situácia v skupine ME bola podobná situácii v skupine Fing-Operácia (obr. 3B). Avšak v skupine NPE sa v mieste implantácie pozorovalo veľké množstvo chondrocytov a proliferácia buniek podobných NP (obr. 3C);
(A) Trabecula je viditeľné v blízkosti koncovej dosky, chondrocyty sú úhľadne usporiadané s rovnomernou veľkosťou a tvarom buniek a bez proliferácie (40 -krát). B) Podmienka implantačného miesta v skupine ME je podobná stavu skupiny SHM. Trabeculae a chondrocyty sú viditeľné, ale v mieste implantácie (40 -krát) nie je zjavná proliferácia. (B) Je zrejmé, že chondrocyty a bunky podobné NP sa významne proliferujú a tvar a veľkosť chondrocytov sú nerovnomerné (40-krát).
Expresia mRNA interleukínu 4 (IL-4), interleukínu 17 (IL-17) a interferónu y (IFN-y) mRNA bola pozorovaná v skupinách NPE aj ME. Keď sa porovnali hladiny expresie cieľových génov, génové expresie IL-4, IL-17 a IFN-y sa významne zvýšili v skupine NPE v porovnaní s expresiami skupiny ME a FUM Operation Group (obr. 4) (P <0,05). V porovnaní so spoločnosťou Fing Operation Group sa hladiny expresie IL-4, IL-17 a IFN-y v skupine ME zvýšili iba mierne a nedosiahli štatistické zmeny (p> 0,05).
Expresia mRNA IL-4, IL-17 a IFN-y v skupine NPE vykázala významne vyšší trend ako v fingovanej operačnej skupine a skupine ME (P <0,05).
Naopak, hladiny expresie v skupine ME nevykazovali žiadny významný rozdiel (p> 0,05).
Analýza Western blot sa uskutočňovala s použitím komerčne dostupných protilátok proti IL-4 a IL-17 na potvrdenie zmenenej expresie mRNA. Ako je znázornené na obrázkoch 5A, B, v porovnaní so skupinou ME a Fing Operation Group, hladiny proteínov IL-4 a IL-17 v skupine NPE sa významne zvýšili (P <0,05). V porovnaní so spoločnosťou Fing Operation Group tiež hladiny proteínov IL-4 a IL-17 v skupine ME tiež nedosiahli štatisticky významné zmeny (p> 0,05).
(A) Hladiny proteínov IL-4 a IL-17 v skupine NPE boli významne vyššie ako v skupine ME a placebom (P <0,05). B) Western blot histogram.
V dôsledku obmedzeného počtu ľudských vzoriek získaných počas chirurgického zákroku sú jasné a podrobné štúdie patogenézy MC trochu ťažké. Pokúsili sme sa zriadiť zvierací model MC, ktorý by študoval jeho potenciálne patologické mechanizmy. Súčasne sa na sledovanie priebehu MC indukovaného autoimplantom NP použilo rádiologické hodnotenie, histologické hodnotenie a molekulárne biologické hodnotenie. Výsledkom bolo, že model implantácie NP viedol k postupnej zmene intenzity signálu z 12-týždňových do 20-týždňových časových bodov (zmiešaný nízky signál v sekvenciách T1W a nízky signál v sekvenciách T2W), čo naznačuje zmeny tkaniva a histologické a molekulárne a molekulárne Biologické hodnotenia potvrdili výsledky rádiologickej štúdie.
Výsledky tohto experimentu ukazujú, že vizuálne a histologické zmeny sa vyskytli v mieste porušenia tela stavcov v skupine NPE. Súčasne sa pozorovala expresia génov IL-4, IL-17 a IFN-y, ako aj IL-4, IL-17 a IFN-y, čo naznačuje, že porušenie autológneho tkaniva jadra pulposus v stavbe Telo môže spôsobiť sériu signálnych a morfologických zmien. Je ľahké zistiť, že charakteristiky signálu stavcových telieska živočíšneho modelu (nízky signál v sekvencii T1W, zmiešaný signál a nízky signál v sekvencii T2W) sú veľmi podobné charakteristikám ľudských stavcových buniek a tiež charakteristiky MRI. Potvrďte pozorovania histológie a hrubej anatómie, to znamená, že zmeny v bunkách stavcov sú progresívne. Aj keď zápalová reakcia spôsobená akútnou traumou sa môže objaviť krátko po vchode, výsledky MRI ukázali, že progresívne zvyšujúce sa zmeny signálu sa objavili 12 týždňov po prepichnutí a pretrvávali až 20 týždňov bez akýchkoľvek príznakov zotavenia alebo zmeny zmien MRI. Tieto výsledky naznačujú, že autológna stavcová NP je spoľahlivou metódou na stanovenie progresívneho MV u králikov.
Tento model punkcie si vyžaduje primerané zručnosti, čas a chirurgické úsilie. Pri predbežných experimentoch môže viesť k vytvoreniu stavcových osteofytov disekcia alebo nadmerná stimulácia paravertebrálnych ligamentických štruktúr. Malo by sa venovať starostlivosti, aby ste nepoškodzovali alebo nepodrali susedné disky. Pretože hĺbka penetrácie musí byť regulovaná, aby sa získali konzistentné a reprodukovateľné výsledky, ručne sme vytvorili zástrčku odrezaním plášťa 3 mm dlhej ihly. Pomocou tejto zástrčky zaisťuje rovnomernú hĺbku vŕtania v stavcovom tele. V predbežných experimentoch traja ortopedickí chirurgovia zapojení do operácie zistili, že 16-gauge ihly ľahšie pracujú s ihlami ako 18-gauge ihly alebo inými metódami. Aby sa predišlo nadmernému krvácaniu počas vŕtania, držanie ihly na chvíľu poskytne vhodnejšiu inzerčnú otvor, čo naznačuje, že určitý stupeň MC je možné týmto spôsobom kontrolovať.
Aj keď sa mnohé štúdie zameriavali na MC, len málo je známe o etiológii a patogenéze MC25,26,27. Na základe našich predchádzajúcich štúdií sme zistili, že autoimunita hrá kľúčovú úlohu pri výskyte a vývoji MC12. Táto štúdia skúmala kvantitatívnu expresiu IL-4, IL-17 a IFN-y, ktoré sú hlavnými diferenciačnými cestami CD4+ buniek po stimulácii antigénu. V našej štúdii, v porovnaní s negatívnou skupinou, skupina NPE mala vyššiu expresiu IL-4, IL-17 a IFN-y a hladiny proteínov IL-4 a IL-17 boli tiež vyššie.
Klinicky je expresia mRNA IL-17 zvýšená v bunkách NP od pacientov s herniou diskov28. Zvýšené hladiny expresie IL-4 a IFN-y boli tiež nájdené v akútnom modeli nekompresívnej hernizácie diskov v porovnaní so zdravými kontrolami29. IL-17 hrá kľúčovú úlohu pri zápalu, poranení tkaniva pri autoimunitných chorobách30 a zvyšuje imunitnú reakciu na IFN-y31. Zvýšené poškodenie tkaniva IL-17 bolo hlásené u myší MRL/LPR MICE32 a autoimunity, ktoré sú nastaviteľné myši33. IL-4 môže inhibovať expresiu prozápalových cytokínov (ako je IL-lp a TNFa) a aktivácie makrofágov34. Uviedlo sa, že expresia mRNA IL-4 bola v skupine NPE odlišná v porovnaní s IL-17 a IFN-y v rovnakom časovom bode; Expresia mRNA IFN-y v skupine NPE bola významne vyššia ako v ostatných skupinách. Preto môže byť produkcia IFN-y mediátorom zápalovej reakcie indukovanej interkaláciou NP. Štúdie ukázali, že IFN-y je produkovaný viacerými typmi buniek, vrátane aktivovaných pomocných T buniek typu 1, prírodných zabíjacích buniek a makrofágov35,36 a je kľúčovým prozápalovým cytokínom, ktorý podporuje imunitné reakcie37.
Táto štúdia naznačuje, že autoimunitná reakcia sa môže podieľať na výskyte a vývoji MC. Luoma a kol. zistili, že charakteristiky signálu MC a významného NP sú na MRI podobné a obidve vykazujú vysoký signál v T2W sekvencii38. Niektoré cytokíny sa potvrdili, že sú úzko spojené s výskytom MC, ako je IL-139. Ma a kol. navrhol, že vyčnievanie NP smerom nahor alebo nadol môže mať veľký vplyv na výskyt a vývoj MC12. Bonechko40 a Herzbein a kol. Výčnelky NP zavádzajú do krvi cudzie telá, čím sprostredkujú miestne autoimunitné reakcie42. Autoimunitné reakcie môžu vyvolať veľké množstvo imunitných faktorov, a keď sú tieto faktory neustále vystavené tkanivám, môžu spôsobiť zmeny v signalizácii43. V tejto štúdii sú nadmerná expresia IL-4, IL-17 a IFN-y typickými imunitnými faktormi, čo ďalej dokazuje úzky vzťah medzi NP a MCS44. Tento zvierací model dobre napodobňuje prielom NP a vstup do koncovej dosky. Tento proces ďalej odhalil vplyv autoimunity na MC.
Ako sa očakávalo, tento zvierací model nám poskytuje možnú platformu na štúdium MC. Tento model má však stále určité obmedzenia: po prvé, počas fázy pozorovania zvierat je potrebné niektoré králiky stredných štádií eutanizovať na histologické a molekulárne biologické testovanie, takže niektoré zvieratá v priebehu času „vypadávajú“. Po druhé, aj keď sú v tejto štúdii stanovené tri časové body, bohužiaľ sme modelovali iba jeden typ MC (zmena modiky typu I), takže nestačí na reprezentáciu procesu vývoja ľudských chorôb, a je potrebné nastaviť viac časových bodov a je potrebné nastaviť viac časových bodov Lepšie sledujte všetky zmeny signálu. Po tretie, zmeny v štruktúre tkanív môžu byť skutočne jasne preukázané histologickým zafarbením, ale niektoré špecializované techniky môžu lepšie odhaliť mikroštruktúrne zmeny v tomto modeli. Napríklad polarizovaná svetelná mikroskopia sa použila na analýzu tvorby fibrocartiláže v králičom medzistátnych diskoch45. Dlhodobé účinky NP na MC a endplate si vyžadujú ďalšie štúdium.
Päťdesiatštyri mužských novozélandských bielych králikov (hmotnosť asi 2,5-3 kg, vek 3-3,5 mesiaca) bolo náhodne rozdelených na fingovanú operáciu, skupinu svalovej implantácie (ME skupina) a skupinu implantácie nervov (skupina NPE). Všetky experimentálne postupy boli schválené Etickou komisiou nemocnice Tianjin a experimentálne metódy sa uskutočňovali v prísnom v súlade so schválenými usmerneniami.
Určité vylepšenia sa dosiahli chirurgickej technike S. Sobajima 46. Každý králik bol umiestnený do bočnej polohy recibencie a predný povrch piatich po sebe idúcich bedrových medzistavcových diskov (IVDS) bol vystavený pomocou posterolaterálneho retroperitoneálneho prístupu. Každý králik dostal celkovú anestéziu (20% uretán, 5 ml/kg cez ušnú žilu). Z dolného okraja rebier do panvového okraja, 2 cm ventrálne po svaly Paravertebrálnych svalov, sa uskutočnil pozdĺžny rez kože. Pravá anterolaterálna chrbtica z L1 do L6 bola exponovaná ostrou a tupou disekciou prekrývajúceho sa subkutánneho tkaniva, retroperitoneálneho tkaniva a svalov (obr. 6A). Hladina disku bola stanovená s použitím panvového okraja ako anatomického orientačného bodu pre úroveň disku L5-L6. Použite 16-gauge punktúru ihlu na vŕtanie otvoru v blízkosti koncovej dosky stavca L5 do hĺbky 3 mm (obr. 6B). Použite 5-ml injekčnú striekačku na aspiráciu autológneho jadrového pulposusu na medzispántnom disku L1-L2 (obr. 6C). Odstráňte jadro pulposus alebo sval podľa požiadaviek každej skupiny. Po prehĺbení diery vŕtania sa na hlbokú fasciu, povrchovú fasciu a pokožku umiestnia absorbovateľné stehy, čím sa počas operácie starajú o to, aby nepoškodzovali periosteálne tkanivo tela stavcov.
(A) Disk L5 - L6 je exponovaný prostredníctvom posterolaterálneho retroperitoneálneho prístupu. (B) Na vŕtanie otvoru v blízkosti koncovej platne L5 použite ihlu s rozlohou 16 gauge. (C) Zozbiera sa autológne MF.
Všeobecná anestézia sa podávala s 20% uretánom (5 ml/kg) podávaným prostredníctvom ušnej žily a röntgenové snímky bedrovej chrbtice sa opakovali v 12, 16 a 20 týždňoch po operácii.
Králiky boli usmrtené intramuskulárnou injekciou ketamínu (25,0 mg/kg) a intravenóznym pentobarbitálom sodným (1,2 g/kg) 12, 16 a 20 týždňov po operácii. Celá chrbtica bola odstránená na histologickú analýzu a uskutočnila sa skutočná analýza. Na detekciu zmien v imunitných faktoroch sa použili kvantitatívna reverzná transkripcia (RT-QPCR) a Western blotting.
Vyšetrenia MRI sa uskutočňovali u králikov s použitím 3,0 T klinického magnetu (GE Medical Systems, Florence, SC) vybaveného ortogonálnym končatínovým cievkovým prijímačom. Králiky boli anestetizované 20% uretánom (5 ml/kg) cez ušnú žilu a potom sa umiestnili na chrbte do magnetu s bedrovou oblasťou vycentrovanou na kruhovej povrchovej cievke s priemerom 5 palcov (GE Medical Systems). Na definovanie umiestnenia bedrového disku od L3-L4 do L5-L6 boli získané koronálne snímky lokalizátorov s vážením T2 (TR, 1445 MS; TE, 37 ms). Plátky vážené Sagitálnou rovinou T2 sa získali s nasledujúcimi nastaveniami: rýchla sekvencia spin-echo s opakovacím časom (TR) 2200 ms a časom echo (TE) 70 ms, matica; vizuálne pole 260 a ôsmich podnetov; Hrúbka rezania bola 2 mm, medzera bola 0,2 mm.
Po odfotení poslednej fotografie a zabití posledného králika boli na histologické vyšetrenie odstránené simulované svalové, svalové a NP disky. Tkanivá sa fixovali v 10% neutrálnom pufrovanom formalíne počas 1 týždňa, odvažne s kyselinou etyléndiamíntetraoctovou a resekciou parafínu. Tkanivové bloky boli zabudované do parafínu a nakrájané na sagitálne rezy (hrúbka 5 um) pomocou mikrotómu. Rezy boli zafarbené hematoxylínom a eozínom (H&E).
Po zhromaždení medzistavcových diskov z králikov v každej skupine sa celková RNA extrahovala pomocou stĺpca UNIQ-10 (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., Čína) podľa pokynov výrobcu a reverzného transkripčného systému Promega Inc. , Madison, WI, USA). Uskutočnil sa reverzná transkripcia.
RT-qPCR sa uskutočňovala s použitím Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., USA) a SYBR Green Jump Start Taq Readymix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) podľa pokynov výrobcu. Reakčný objem PCR bol 20 ul a obsahoval 1,5 ul zriedenej cDNA a 0,2 μm každého priméru. Priméry boli navrhnuté spoločnosťou Oligoperfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA) a vyrobené spoločnosťou Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Čína) (tabuľka 1). Boli použité nasledujúce podmienky tepelnej cyklistiky: počiatočný krok aktivácie polymerázy pri 94 ° C počas 2 minút, potom 40 cyklov po 15 s pri 94 ° C na denaturáciu templátu, žíhanie počas 1 minúty pri 60 ° C, predĺženie a fluorescencia. Merania sa uskutočňovali počas 1 minúty pri 72 ° C. Všetky vzorky boli amplifikované trikrát a priemerná hodnota sa použila na analýzu RT-QPCR. Amplifikačné údaje boli analyzované pomocou FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA). Expresia génu IL-4, IL-17 a IFN-y sa normalizovala na endogénnu kontrolu (ACTB). Relatívne hladiny expresie cieľovej mRNA sa vypočítali pomocou metódy 2-ACCT.
Celkový proteín sa extrahoval z tkanív s použitím tkanivového homogenizátora v RIPA lýze pufra (obsahujúci koktail inhibítora proteázy a fosfatázy) a potom sa odstránil pri odstraňovaní tkanivových debrisov pri 13 000 ot./min. Počas 20 minút pri 4 ° C. Päťdesiat mikrogramov proteínu sa naložilo na dráhu, oddelené 10% SDS-PAGE a potom sa prenieslo na PVDF membránu. Blokovanie sa uskutočňovalo v 5% non-fat suchom mlieku v slanom soľnom roztoku (TBS) obsahujúcich 0,1% Tween 20 počas 1 hodiny pri teplote miestnosti. Membrána sa inkubovala s primárnou protilátkou králičieho anti-dekorínu (zriedená 1: 200; Boster, Wuhan, Čína) (zriedená 1: 200; Bioss, Peking, Čína) cez noc pri 4 ° C a reagovala v druhé dni; so sekundárnou protilátkou (kozie anti-králičie imunoglobulín G pri riedení 1: 40 000) v kombinácii s chrenovou peroxidázou (Boster, Wuhan, Čína) počas 1 hodiny pri teplote miestnosti. Signály Western blot sa detegovali zvýšenou chemiluminiscenciou na chemiluminiscenčnej membráne po röntgenovom ožiarení. Na denzitometrickú analýzu sa naskenovali bloty a kvantifikovali pomocou softvéru BandScan a výsledky boli vyjadrené ako pomer cieľovej génovej imunoreaktivity k tubulínovej imunoreaktivite.
Štatistické výpočty sa uskutočňovali pomocou softvérového balíka SPSS16.0 (SPSS, USA). Údaje zozbierané počas štúdie boli vyjadrené ako priemer ± štandardná odchýlka (priemer ± SD) a analyzované pomocou jednosmernej analýzy rozptylu opakovaných meraní (ANOVA) na stanovenie rozdielov medzi týmito dvoma skupinami. P <0,05 sa považoval za štatisticky významný.
Zriadenie zvieracieho modelu MC implantáciou autológnych NP do stavcového tela a vykonávaním makroanatomického pozorovania, MRI analýzy, histologického hodnotenia a molekulárnej biologickej analýzy sa môžu stať dôležitým nástrojom na hodnotenie a porozumenie mechanizmom ľudského MC a rozvoju nových terapeutických látok zásahy.
Ako citovať tento článok: Han, C. a kol. Živočíšny model modických zmien bol stanovený implantáciou autológneho jadra pulposus do subchondrálnej kosti bedrovej chrbtice. Sci. Rep. 6, 35102: 10,1038/SREP35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., a Boos, N. Magnetická rezonancia Zobrazovanie bedrovej chrbtice: Prevalencia hernie a retencie diskov, kompresia nervov, abnormality koncových dosiek a osteoartritída s fazetovým kĺbom u asymptomatických dobrovoľníkov . rýchlosť. Radiology 209, 661 - 666, doi: 10.1148/rádiológia.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS a LeBoeuf-Eed, K. Modické zmeny a ich vzťah k klinickým zisteniam. Európsky časopis chrbtice: Oficiálna publikácia Európskej spoločnosti chrbtice, Európska spoločnosť deformity miechy a Európska spoločnosť pre výskum krčnej chrbtice 15, 1312–1319, doi: 10.1007/S00586-006-0185-X (2006).
Kuisma, M., a kol. Modické zmeny v bedrových koncoch stavcov: prevalencia a spojenie s bolesťou chrbta a ischias u mužských pracovníkov stredného veku. Chrbtica 32, 1116 - 1122, doi: 10,1097/01.Brs.0000261561.12944.ff (2007).
De Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K. a Dalinka, M. MRI zmeny kostnej drene v blízkosti koncovej dosky pri degeneratívnej chorobe bedrovej chrbtice. Ajr. American Journal of Radiology 149, 531 - 534, doi: 10,2214/Ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ a Carter, JR Degeneratívne ochorenie diskov: Vyhodnotenie zmien stavcových dreň s MRI. Radiology 166, 193–199, doi: 10.1148/rádiológia.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS a Carter, JR zobrazovanie degeneratívnej choroby diskov. Radiology 168, 177 - 186, doi: 10,148/rádiológia.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, a kol. Prediktory zmeny signálu neovertebrálneho endplate (modiku) v bežnej populácii. Európsky časopis chrbtice: Oficiálna publikácia Európskej spoločnosti chrbtice, Európska spoločnosť deformity miechy a Európska spoločnosť pre výskum krčnej chrbtice, divízia 19, 129–135, doi: 10.1007/S00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB a Mannisch, K. Modické zmeny po hernii bedrového disku. Európsky časopis chrbtice: Oficiálna publikácia Európskej spoločnosti chrbtice, Európska spoločnosť pre deformitu miechy a Európska spoločnosť pre výskum krčnej chrbtice 16, 977–982, doi: 10.1007/S00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehas, T., Gronblad, M. a Kaapa, E. Modické zmeny typu I môžu predpovedať rýchlo progresívnu deformačnú degeneráciu disku: 1-ročná prospektívna štúdia. European Spine Journal 21, 1135-1142, doi: 10.1007/S00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, Fd, Fang, XQ a Fan, SW Modic zmeny: možné príčiny a príspevok k degenerácii bedrového disku. Lekárske hypotézy 73, 930 - 932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV Interný disk Rupture. Problémy s kolapsom diskov počas 50 rokov. Spine (Phila PA 1976) 11, 650 - 653 (1986).
Čas príspevku: december 13-2024